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【重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法.该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定】
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问题描述:

重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法.该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景.图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程.其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物(图中引物2、引物3),分别PCR,获得有重叠链的两种 DNA片段,再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得目的基因.结合所学知识,分析下列问题.

(1)引物中G+C的含量影响着引物与模板DNA结合的稳定性,引物中G+C的含量越高,结合稳定性___.

(2)在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中,必须将引物l、2和引物3、4置于不同反应系统中,这是因为___.

(3)若在引物l和引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均复制一次,共产生___种双链DNA分子.

(4)在引物1、引物2组成的反应系统中,经第一阶段形成图示双链DNA至少要经过___ 次复制.

(5)若利用微生物扩增该目的基因,其基本步骤包括:___、___、微生物的筛选和培养、从菌群中获取目的基因.

李庆回答:
  (1)由于C-C之间有三个氢键,而A-T之间有两个氢键,所以引物中C+C含量越高,引物与模板DNA的结合就越稳定.(2)从图中可以看出,引物2和引物3相应的碱基之间可以进行配对,所以如果将引物2和3放在一个反应系统中,...
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