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用PAGE胶跑DNA用PAGE胶跑DNA的话,那和westernblot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而且marker没有颜色,怎么知道跑到了哪里?谢谢!
1人问答
问题描述:

用PAGE胶跑DNA用PAGE胶跑DNA的话,那和westernblot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而且marker没有颜色,怎么知道跑到了哪里?谢谢!

刘良田回答:
  首先原理差不多,具体细节差异还是有的。跑DNA的话,可以参见人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯。两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)但是跑DNA一般用TBE(Tris、硼酸、EDTA),还含尿素用于western的蛋白胶多用Tris-HCl,SDSbuffer。蛋白较一般有分离胶和浓缩胶。浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳。DNA的loadingbuffer含染料溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢。
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