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人外周血单核细胞能合成白介素2(IL-2).该蛋白可增强机体免疫功能,但在体内易被降解.研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因,并在酵母菌中表达,获得具
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问题描述:

人外周血单核细胞能合成白介素2(IL-2).该蛋白可增强机体免疫功能,但在体内易被降解.研究人员将IL-2基因与人血清白蛋白(HSA)基因拼接成一个融合基因,并在酵母菌中表达,获得具有IL-2生理功能、且不易降解的IL-2-HSA融合蛋白.其技术流程如图.请回答:

(1)培养人外周血单核细胞的适宜温度为______℃;图中②表示______过程.

(2)表达载体1中的位点______,应为限制酶BglⅡ的识别位点,才能成功构建表达载体2.

(3)表达载体2导入酵母菌后,融合基因转录出的mRNA中,与IL-2蛋白对应的碱基序列不能含有______(起始、终止)密码子,才能成功表达出IL-2-HSA融合蛋白.

(4)应用______杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白.

黄虎回答:
  (1)动物细胞培养所需要的条件是:95%空气和5%CO2气体环境、适宜温度(37℃)和PH、无毒无菌的环境及合适的营养成分,其培养基中通常需加入血清、血浆等一些天然成分;图中②mRNA→cDNA,表示逆转录过程.   (2)根据目的基因IL-2cDNA的两端的酶切位点分别是EcoRⅠ和BglⅡ,所以表达载体1也必须有这两个酶切位点,表达载体1上已有EcoRⅠ,推测位点a应含有BglⅡ.   (3)融合基因转录出的mRNA中与IL-2蛋白对应的碱基序列中不能含有终止密码,才能成功表达出IL-2-HsA融合蛋白.否则HSA蛋白将无法合成.   (4)应用抗原-抗体杂交技术可检测酵母菌是否表达出IL-2-HSA融合蛋白.   故答案为:   (1)37 逆转录   (2)a   (3)终止   (4)抗原-抗体
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